一、目的和要求
通过实验要求了解鞭毛菌亚门真菌的主要形态特征,掌握与植物病害有关重要属的形态特征、分类依据及所致病害的症状特点,同时学习使用检索表来鉴定病菌,为分类鉴定打下初步基础。实验分两次完成。
二、材料和用具
1实验材料:
植物病害标本或永久玻片
根肿菌属:芸苔根肿菌(Plasmodiophora brassicae)及病害
粉痂菌属:马铃薯粉痂菌(Spongospora subterranean)及病害
多粘霉属:禾谷多粘霉(Polymyxagraminis)及病害
节壶菌属:玉米褐斑病菌(Physodermamaydis)及病害
绵霉属:水稻烂秧绵霉菌(Achlyaspp.)及病害
腐霉属:瓜果腐霉菌(Pythiumaphanidermatum)及病害
疫霉属:致病疫霉(Phytophthorainfestans)及病害
指梗霉属:粟白发病菌(Sclerosporagraminicola)及病害
单轴霉属;葡萄霜霉病菌(Plasmoparaviticola)及病害
假霜霉属:黄瓜霜霉病菌(Pseudoperonosporacubensis)及病害
霜霉属:十字花科植物霜霉病菌(Peronosporaparasitica)及病害
白锈属:十字花科蔬菜白锈病菌(Albugocandida)及病害
2实验用具
显微镜、擦镜纸、浮载剂(蒸馏水或乳酚油)、载玻片、盖玻片、挑针、刀片、小木块、吸水纸、酒精灯、火柴。
三、内容与方法
1根肿菌纲(Plasmodiophoromycetes)
(l)根肿菌属(Plasmodiophora):观察芸薹根肿病害标本的症状,注意受害植株的根部是否肿大。镜检芸薹根肿菌永久玻片,观察休眠孢子的分布位置、形态及有无细胞壁;有病菌侵害和没有病菌侵害植物细胞的大小及内含物。注意区分原生质团和休眠孢子。
(2)粉痂菌属(Spongospora):观察马铃薯粉痂病害(S. subterranean)标本症状。镜检马铃薯粉痂病菌永久切片,观察休眠孢子的分布和形态特征,以及有病菌的寄主细胞有无明显肿大。
(3)多粘菌属(Polymyxa):观察禾谷多粘菌(P.graminis)引起的小麦病害症状。用解剖刀或镊子撕取小麦根基皮层,制成临时玻片,镜检。或镜检禾谷多粘菌的永久玻片,观察病菌休眠孢子及排列特征。
2壶菌纲(Chytridiomycetes)
节壶属(Physoderma):观察由玉蜀黍节壶菌(P.maydis)为害玉米引起的褐斑病标本,注意受害部位病斑颜色及特点如何。用针挑取受害病组织内呈黄褐色粉末状物制成临时玻片,或直接镜检玉蜀黍节壶菌的永久玻片,观察休眠孢子囊的颜色和形态特征。
3卵菌纲(Oomycetes)
3.1水霉目通常生活于水中或潮湿土壤中,营腐生生活,仅少数与植物病害有关,如寄生稻苗引起烂秧。
(1)水霉属(Saprolegnia):孢子囊圆筒形或棍棒状,新的孢子囊从老的孢子囊内的基部长出。游动孢子具明显的两游现象〔水稻烂秧水霉菌(S.monilifera)〕。观看水霉属真菌游动孢子两游现象录象。
(2)绵霉属(Achlya):观察水稻烂秧症状。用镊子取病苗放于盛有浅水的培养皿中,直接在低倍镜下检查,或用镊子小心撕下病苗上的棉絮状物制成临时玻片镜检。注意比较游动孢子囊和菌丝的形态有无显著区别?观察孢子囊的层出现象是属于哪种层出类型?游动孢子释放是迅速离开孢子囊还是在排孢孔口处休止、聚集?观察是否产生有性器官?仔细观察藏卵器、雄器和卵孢子的形态、雄器的位置、藏卵器内卵球的数目。
根据所观察到的病原菌形态,并参照水霉属和绵霉属的分类依据,推测你所看到的病菌属于哪个属。
3.3.2霜霉目许多霜霉目真菌是重要的植物病原菌。
(1)腐霉属(Pythium):瓜果腐霉(P.aphanidermatum)可以引起多种经济作物幼苗的猝倒病和果实的绵腐病。
观察黄瓜病果上的白色菌丝体。将生长旺盛的小块菌丝体移至清水中20℃培养24-48小时,菌丝顶端即形成大量游动孢子囊,用针挑取在清水中培养过的菌丝,观察腐霉菌的游动孢子囊。注意区分菌丝、孢囊梗和孢子囊。观察泡囊及游动孢子的形态特征。注意观察藏卵器和雄器的特征,并与水稻绵霉菌的雄器和藏卵器相比较。
观看瓜果腐霉真菌游动孢子两游现象录象。
(2)疫霉属(Phytophthora):致病疫霉(P.infestans)引起晚疫病。观察受害马铃薯叶片的症状。当气候潮湿时,在病叶背面常出现灰白色霜状霉层,是病菌什么形态?挑取少许霉状物在显微镜下检查,观察孢子囊是什么形状?孢囊梗和菌丝的形态有何不同?
或挑取烟草疫霉水培养中的菌丝体,用水作为浮载剂制片镜检。注意孢子囊顶部有乳头状突起,折光率较强,即乳突。注意有无球形厚垣孢子,观察孢子囊形状的变化。将玻片放入4℃冰箱中5-10分钟,取出立即镜检,观察孢子囊内游动孢子的形成和释放过程,注意与腐霉菌有什么不同。
上述两个疫霉种均为异宗配合的,必须将两种不同交配型的菌株移植在同一平板上于18-20℃培养10-20天,就会出现有性生殖过程。挑取两菌株形成的菌落交界处带培养基的菌丝镜检雄器和藏卵器的形态。比较马铃薯晚疫病菌和腐霉菌的藏卵器与雄器的着生方式有何区别?
(3)霜霉属(Peronospora):十字花科植物霜霉菌(Peronosporaparasitica)为害油菜和其它十字花科蔬菜,引起霜霉病。观察十字花科霜霉菌为害油菜叶片正面和背面及花序的症状。
取白菜霜霉病叶片,用挑针挑取少量在叶背面的霜霉,制成临时玻片后镜检。注意观察孢囊梗的分枝和顶端形态。
参照教科书和挂图,对照下列检索表,制片观察各种霜霉病菌的临时玻片或病原菌永久玻片,掌握霜霉科几个常见属的主要形态特征及所致病害症状。
霜霉科主要属的检索表
1.孢囊梗粗壮,上部为重复2~3次的不规则二叉分枝…………………指梗霉属(Sclerospora)
1.孢囊梗较细………………………………………………………………2
2.孢囊梗单轴分枝,小枝与主轴成直角,分枝末端平钝……………单轴霉属(Plasmopara)
2.孢囊梗成锐角二叉分枝………………………………………………3
3.分枝两侧不对称,顶端尖锐……………………………………………假霜霉属(Pseudoperonospora)
3.分枝两侧对称……………………………………………………………4
4.分枝顶端尖细…………… ………………………………………霜霉属(Peronospora)
4.分枝顶部膨大,具3一4个指状周生小梗………………………盘梗霉属(Bremia)
(4)白锈菌属(Albugo):观察白锈病症状特征。制作临时玻片镜检苋菜白锈病菌(Albugobliti)或白菜白锈病菌(Albugo candida)的孢子囊堆和孢子囊梗的形态特征,以及孢子囊的排列方式。
取白菜白锈病肿大的茎或荚,选取白色疱斑处切片,置于滴加乳酚油的载玻片,用酒精灯略加热,使病组织透明,然后盖上盖玻片镜检,可见到白锈病菌的卵孢子,一个藏卵器内只有一个卵球。卵孢子表面有刻点状花纹,是白锈菌分类的依据之一。
四、作业与思考题
(1)观察十字花科蔬菜根肿病菌、马铃薯粉痂病菌、禾谷多粘霉菌、玉米褐斑病菌,绘休眠孢子囊图。
(2)绘瓜果腐霉病菌、马铃薯晚疫病菌或十字花科蔬菜白锈病菌孢囊梗、孢子囊、卵孢子图。
(3)绘大白菜霜霉病菌孢囊梗、孢子囊图。
(4)卵菌纲真菌有哪些特点?结合它们的生物学特点、寄生性及病害特点说明本纲真菌的进化情况。 |