植株内生菌处理

1.采集原材料：用园艺铲、园艺耙等小心刨开植株周围土壤，尽量不对根部造成物理伤害，防止植株外部细菌混入影响实验结果。

2.原材料的初步处理：用缓慢自来水流清洗植株外部，注意尽量不要伤害植株组织。

3.原材料的后续处理：在操作台内，用灭菌剪刀对植物组织部位进行挑选以及剪取。

叶片：同一植株同一茎上中下三个部位分别剪取叶片，从叶腋处剪下。不同茎的剪取方法同上。

茎部：同一植株同一茎上中下三个部位分别剪取茎段，长度3-5cm左右（因为本人实验过程中植株均规模较小，所以长度不宜过长；过短可能会导致表面消毒过程中可能会因为某步骤时间过长而导致杀死植物内生细菌）。不同茎的剪取方法同上。

花：同一植株同一茎上中下三个部位分别剪取花，从花托基部剪下。不同茎的剪取方法同上。

根部：从植株基部剪下根部，如果为须根，小心剪下须根不要伤害根部主体。

4.材料的表面消毒：

（1）无菌水浸泡材料30s，用镊子夹出

（2）75%酒精浸泡50s，用镊子夹出

（3）无菌水漂洗

（4）3%次氯酸钠浸泡50s，用镊子夹出

（5）无菌水漂洗2次，第3次冲洗的无菌水存留

5.空白对照CK制作：接种环沾取第3次冲洗的无菌水，在平板上S型划线

6.材料组织块切取及贴入培养基

花：用镊子从花上扯下花瓣，若花瓣较大，用手术刀进行分割，面积20-35mm²

叶：用手术刀进行分割叶片，面积20-35mm²

茎：用手术刀进行分割茎段，若茎较粗，切为1mm薄片；若茎较细，长度2-3mm

根：用手术刀进行分割，若根较粗，切为1mm薄片；若根较细，长度2-3mm

贴培养基的组织所有剖面须皆为本步骤中新鲜切割

叶、茎截面积较大且组织硬度适中的，可用镊子镊取切取新剖面的组织块进行S型划线

7.培养基封口培养（将不同形态、颜色的菌在单独接在新平板上）